Estruturação de centro de transplante de microbiota fecal em hospital universitário no Brasil / Structuring a fecal microbiota transplantation center in a university hospital in brazil

ABSTRACT BACKGROUND: Fecal microbiota transplantation (FMT) is an important therapeutic option for recurrent or refractory Clostridioides difficile infection, being a safe and effective method. Initial results suggest that FMT also plays an important role in other conditions whose pathogenesis involves alteration of the intestinal microbiota. However, its systematized use is not widespread, especially in Brazil. In the last decade, multiple reports and several cases emerged using different protocols for FMT, without standardization of methods and with variable response rates. In Brazil, few isolated cases of FMT have been reported without the implantation of a Fecal Microbiota Transplantation Center (FMTC). OBJECTIVE: The main objective of this study is to describe the process of implanting a FMTC with a stool bank, in a Brazilian university hospital for treatment of recurrent and refractory C. difficile infection. METHODS: The center was structured within the criteria required by international organizations such as the Food and Drug Administration, the European Fecal Microbiota Transplant Group and in line with national epidemiological and regulatory aspects. RESULTS: A whole platform involved in structuring a transplant center with stool bank was established. The criteria for donor selection, processing and storage of samples, handling of recipients before and after the procedure, routes of administration, short and long-term follow-up of transplant patients were determined. Donor selection was conducted in three stages: pre-screening, clinical evaluation and laboratory screening. Most of the candidates were excluded in the first (75.4%) and second stage (72.7%). The main clinical exclusion criteria were: recent acute diarrhea, overweight (body mass index ≥25 kg/m2) and chronic gastrointestinal disorders. Four of the 134 candidates were selected after full screening, with a donor detection rate of 3%. CONCLUSION: The implantation of a transplant center, unprecedented in our country, allows the access of patients with recurrent or refractory C. difficile infection to innovative, safe treatment, with a high success rate and little available in Brazil. Proper selection of qualified donors is vital in the process of implementing a FMTC. The rigorous clinical evaluation of donors allowed the rational use of resources. A transplant center enables treatment on demand, on a larger scale, less personalized, with more security and traceability. This protocol provides subsidies for conducting FMT in emerging countries.

RESUMO CONTEXTO: O Transplante de microbiota fecal (TMF) é uma importante opção terapêutica para a infecção recorrente ou refratária pelo Clostridioides difficile, sendo método seguro e eficaz. Resultados iniciais sugerem que o TMF também desempenha papel relevante em outras afecções cuja patogênese envolve a alteração da microbiota intestinal. No entanto, seu uso sistematizado é pouco difundido, especialmente no Brasil. Na última década, surgiram múltiplos relatos e séries de casos utilizando diferentes protocolos para o TMF, sem padronização de métodos e com taxas de resposta variáveis. No Brasil, poucos casos isolados de TMF foram relatados sem a implantação de um Centro de Transplante de Microbiota Fecal (CTMF). OBJETIVO: O principal objetivo deste estudo foi descrever o processo de implantação de um CTMF com banco de fezes, em hospital universitário brasileiro, para tratamento de infecção recorrente e refratária pelo C. difficile. MÉTODOS: O CTMF foi estruturado dentro dos critérios exigidos e aprovados por organismos internacionais como o Food and Drug Administration, Grupo Europeu de Transplante de Microbiota Fecal e em consonância com os aspectos epidemiológicos e regulatórios nacionais. RESULTADOS: Foi estabelecida toda uma plataforma envolvida na estruturação de um centro de transplante com fezes congeladas. Determinou-se os critérios para seleção de doadores, processamento e armazenamento de amostras, manejo dos receptores antes e após o procedimento, uniformização de vias de administração do substrato fecal e seguimento a curto e longo prazo dos pacientes transplantados. A seleção dos doadores foi conduzida em três etapas: pré-triagem, avaliação clínica e exames laboratoriais. Boa parte dos candidatos foram excluídos na primeira (75,4%) e segunda etapa (72,7%). Os principais critérios clínicos de exclusão foram: diarreia aguda recente, excesso de peso (IMC ≥25 kg/m2) e distúrbios gastrointestinais crônicos. Quatro dos 134 candidatos foram selecionados após a triagem completa, com taxa de detecção de doadores de 3%. CONCLUSÃO: A implantação de um CTMF, inédito no nosso meio, possibilita o acesso de pacientes com infecção recorrente e refratária pelo C. difficile a tratamento inovador, seguro, com elevada taxa de sucesso e pouco disponível no Brasil. A seleção apropriada de doadores qualificados é vital no processo de implantação de um CTMF. A avaliação clínica rigorosa dos doadores permitiu o uso racional de recursos para realização de exames laboratoriais. Um CTMF possibilita tratamento sob demanda, em maior escala, menos personalizados, com mais segurança e rastreabilidade. Este protocolo fornece subsídios para a realização de TMF em países emergentes.

Expression of the c-MET, HGF and VEGF biomarkers in intestinal and diffuse gastric cancer in the Brazilian population: a pilot study for the standardization of the quantitative PCR technique

Background: Gastric carcinoma (GC) is the third leading cause of death among malignant tumors worldwide, causing approximately 900,000 deaths/year. Changes in oncogenes that encode tyrosine kinase receptors play an important role in the pathogenesis of GC. MET gene is a proto-oncogene that encodes a tyrosine kinase receptor c-MET and it is required for embryonic development and tissue repair. The hepatocyte growth factor (HGF) is the only known ligand for c-Met receptor. The MET oncogene activation suppresses apoptosis and promotes the survival, proliferation, migration, differentiation and angiogenesis of cells. Among the angiogenic factors, VEGF is the main regulator. Its biological function includes the promotion of endothelial cells mitosis to stimulate cells proliferation. These biomarkers expression in GC is relatively recent and population-based studies are required to define the expression pattern. The aim of this study was to determine qPCR technical standardization to evaluate quantitatively, in paraffin tissue samples, the presence of gene 23 expression of the MET, HGF and VEGF in diffuse and intestinal GC types. Methods: Twenty GC patients were studied, 10 patients were intestinal-type GC (average age 72.1 years) and 10 diffuse-type (average age 50.1 years). In all patients, tissue samples were analyzed from the tumor and distant areas of the tumor tissue. The relative expressions of the tumor markers c-Met, HGF and VEGF were performed by qPCR technique by comparing tumor and non-tumoral samples and they were normalized with the GAPDH constitutive gene. Statistical analysis was performed through T-test. Results: For c-Met, 18/20 (90%) patients expressed the marker and 9/20 (45%) overexpressed this gene, in which three were intestinal-type GC and six were diffuse-type GC. For HGF, only 7/20 (35%) patients expressed this gene and it was overexpressed in 4/20 (20%), in which two were intestinal-type GC and two were diffuse-type GC. For VEGF, 20/20 (100%) patients expressed this marker and in 12/20 (60%) were observed overexpression, in which eight patients had diffuse-type GC and four had intestinal-type GC. Conclusions: qPCR technique was standardized and suitable for expression analysis of the three biomarkers using paraffin embedded tissue samples. Further studies should be carried out to characterize the expression pattern of these biomarkers in GC in the Brazilian population (AU)

Molecular detection of clarithromycin and fluoroquinolones resistance in helicobacter pylori infection, directly applied to gastric biopsies, in an urban brazilian population

ABSTRACT Background - Antimicrobial resistance is the major factor leading to eradication failure in H. pylori treatment. Molecular tests are useful to detect genetic mutations predictive of clarithromycin and fluoroquinolones resistance. Knowledge of the local prevalence rate of resistance is important to define the best recommended treatment. Objective - To assess the prevalence of primary resistance of H. pylori to clarithromycin and fluoroquinolones, using a molecular test, in a Southeastern urban Brazilian population. Methods - A total of 72 H. pylori seropositive patients [65% female, mean age 39 (19-73) years] never treated before for this infection were studied. All patients underwent gastroscopy in addition to antrum and corpus biopsies and molecular test GenoType HelicoDR (Hain Life Science, Germany) to detect H. pylori and point mutations in genes responsible for clarithromycin and fluoroquinolone resistance. The molecular procedure was divided into three steps: DNA extraction from biopsy samples, a multiplex amplification with biotinylated primers and a reverse hybridization. The most frequent point mutations involved in resistance to the two antibiotics were evaluated. Results - Resistance to clarithromycin was detected in nine (12.5%) patients and to fluoroquinolones in eight (11.1%) patients. The point mutation A2147G was the most common (77.8%) among resistant strains to clarithromycin. In 50% of the resistant strains to fluoroquinolones, the mutant codon couldn't be identified. Conclusion - The resistance rates to clarithromycin and fluorquinolones in a large urban population in the Southeast of Brazil were acceptable, suggesting that these drugs remain appropriate options to first and second-line of H. pylori treatment. The molecular test represents an adequate diagnostic tool for monitoring H. pylori resistance.

RESUMO Contexto - A resistência aos antimicrobianos é o principal fator associado à falha terapêutica no tratamento do H. pylori. Testes moleculares são úteis na detecção das mutações genéticas associadas ao desenvolvimento de resistência à claritromicina e fluorquinolonas. O conhecimento da taxa de prevalência local de resistência é importante na definição do melhor esquema terapêutico. Objetivo - Estimar a prevalência de resistência primária do H. pylori à claritromicina e fluorquinolonas, empregando-se um teste molecular, em uma capital do Sudeste do Brasil. Métodos - Setenta e dois pacientes com sorologia positiva para H. pylori [65% mulheres, idade média 39 (19-73) anos], nunca tratados previamente para essa infecção, foram selecionados. Todos os pacientes submeteram-se à endoscopia digestiva com biópsias de antro e corpo e realização do teste molecular GenoType HelicoDR (Hain Life Science, Alemanha) para a detecção do H. pylori e das mutações pontuais dos genes responsáveis pela resistência à claritromicina e fluorquinolonas. O procedimento molecular constituía-se de três etapas: extração do DNA a partir das amostras endoscópicas, amplificação multiplex com primers biotinilados e hibridização reversa. As mutações pontuais mais frequentemente envolvidas com resistência aos dois antibióticos foram avaliadas. Resultados - Resistência à claritromicina foi detectada em nove (12,5%) pacientes e às fluorquinolonas em oito (11,1%) pacientes. A mutação pontual A2147G foi a mais comum (77,8%) entre as cepas resistentes à claritromicina. Em 50% das cepas resistentes à fluorquinolonas, o códon mutante não pôde ser identificado. Conclusão - As taxas de resistência à claritromicina (12,5%) e às fluorquinolonas (11,1%), em uma importante capital do Sudeste do Brasil, mostraram índices aceitáveis, sugerindo que essas drogas permanecem opções apropriadas para o tratamento de primeira e segunda linha do H. pylori. O teste molecular constitui uma ferramenta diagnóstica adequada para monitorar a resistência do H. pylori.

HELICOBACTER PYLORI AND t(11;18)(q21;q21) TRANSLOCATION IN GASTRIC MALT LYMPHOMA / Helicobacter pylori e presença de translocação t(11;18)(q21;q21) em pacientes portadores de linfoma MALT gástrico

Context Gastric mucosa-associated lymphoid tissue (MALT) lymphoma is clearly associated with Helicobacter pylori gastritis and can be cured with anti- H pylori therapy alone. The presence of t(11;18)(q21;q21) translocation is thought to predict a lower response rate to anti- H pylori treatment. Objectives To study the presence of t(11;18)(q21;q21) genetic translocation and its clinical impact in low-grade gastric MALT lymphoma Brazilian patients. Methods A consecutive series of eight patients with gastric MALT lymphoma were submitted to gastroscopy, endoscopic ultrasound, histopathological examination, H pylori search and RT-PCR-based methodology. All patients received anti-H pylori treatment. Eradicated patients were followed-up every 3-6 months for 2 years. Results Eight patients were studied. All patients had tumor involvement restricted to the mucosa or submucosa and seven patients had low-grade gastric MALT lymphoma. All infected patients achieved H pylori eradication. Histological tumor regression was observed in 5/7 (71%) of the low-grade gastric MALT lymphoma patients. The presence of t(11;18)(q21;q21) translocation was found in 4 (57%) of these patients; among them only two had histological tumor regression following H pylori eradication. Conclusions RT-PCR is a feasible and efficient method to detect t(11;18)(q21;q21) translocation, being carried out in routine molecular biology laboratories. The early detection of such translocation can be very helpful for better targeting the therapy to be applied to gastric MALT lymphoma patients. .

Contexto A patogênese do linfoma MALT (tecido linfoide associado à mucosa) gástrico, também conhecido como linfoma de zona marginal de células B, está claramente associada à gastrite por infecção pelo Helicobacter pylori e, a maioria desses tumores pode ser curada apenas com a erradicação da bactéria. A presença da translocação t(11;18)(q21;q21) tem sido identificada como a anomalia citogenética mais comum do linfoma MALT gástrico e sua presença pode prever uma menor taxa de resposta ao tratamento anti-H pylori. Objetivos Estudo da translocação genética t(11;18)(q21;q21) e seu impacto na evolução clínica de pacientes portadores de linfoma MALT gástrico de baixo grau. Métodos Uma série consecutiva de oito pacientes com linfoma MALT gástrico foi submetida à endoscopia digestiva, ultra-sonografia endoscópica, exame histopatológico, pesquisa do H pylori e metodologia rotineira de transcrição reversa seguida de reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) utilizando primers específicos para API2-MALT1. Todos os pacientes receberam tratamento anti-H pylori e retratamento, quando necessário. Após a erradicação, exames endoscópicos foram realizados a cada 3-6 meses durante 2 anos para acompanhamento da evolução do tumor. Resultados Foram estudados oito pacientes (seis mulheres, idade média: 57 anos). Todos apresentavam à ecoendoscopia envolvimento tumoral restrito à mucosa ou submucosa com aparência endoscópica variável. A histologia mostrou que sete pacientes tinham linfoma MALT gástrico de baixo grau e um de alto grau. A erradicação do H pylori foi obtida em todos os pacientes, embora a bactéria não tenha sido identificada em um deles. Foi observada regressão histológica ...